安胃汤含药血清对胃黏膜肠上皮化生细胞内质网应激-自噬通路的影响

作者：**坤; 唐友明^*; 郑景辉; 覃树辉; 莫少丹; 黄敏燕; 吕明艳; 吴鸿运; 梁柳观; 胡鑫

来源：中药新药与临床药理, 2023, 34(10): 1377-1386.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2023.10.007

• 安胃汤
• 胃黏膜肠上皮化生
• 内质网应激
• 自噬
• 增殖
• 凋亡
• 大鼠
• 人胃黏膜上皮细胞

目的 观察安胃汤(黄连、制半夏、白芍等)含药血清对胃黏膜肠上皮化生(GIM)细胞的影响，并基于内质网应激(ERS)-自噬通路探讨其作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组及安胃汤低、中、高剂量组(5.4、10.7、21.4 g·kg-1·d-1)，每组5只；每日1次，连续灌胃给药7 d，制备空白血清及安胃汤含药血清。采用150μmol·L-1鹅去氧胆酸(CDCA)干预24 h，诱导人胃黏膜上皮细胞(GES-1)，复制GIM细胞模型。将细胞分为正常对照组(未经CDCA干预的GES-1细胞)、模型组及安胃汤低、中、高剂量组，以10%空白血清及安胃汤低、中、高剂量含药血清干预24 h。采用Western Blot法检测肠上皮细胞的特异因子MUC2、VILLIN、CDX2蛋白表达情况；MTT法检测细胞增殖活力；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡；免疫荧光法检测细胞中ATF6蛋白表达水平；RT-qPCR法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达水平；Western Blot法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ及Beclin1蛋白表达水平。结果 与正常对照组(0μmol·L-1)比较，CDCA 50、100、150、200μmol·L-1浓度组GES-1细胞的MUC2、VILLIN、CDX2蛋白表达均显著上调(P<0.01)；模型组细胞的增殖水平显著升高(P<0.01)；细胞在G2/M期的细胞比例显著升高(P<0.01)，在G0/G1期和S期的细胞比例明显降低(P<0.05,P<0.01)；细胞的凋亡率显著降低(P<0.01);ATF6蛋白表达显著下调(P<0.01);GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达显著下调(P<0.01);GRP78、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较，安胃汤含药血清低、中、高剂量组GIM细胞的增殖水平均显著降低(P<0.01)；细胞在G2/M期的细胞比例显著降低(P<0.01)，在G0/G1期和S期的细胞比例显著升高(P<0.01)；细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);ATF6蛋白表达显著上调(P<0.01);GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1mRNA表达均明显上调(P<0.05,P<0.01);GRP78、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论 安胃汤含药血清可将CDCA诱导的GIM细胞周期阻滞在S期，并抑制其增殖，诱导其凋亡，可能与其调控ERS途径，诱导细胞自噬相关。

• 单位
  广西中医药大学附属瑞康医院; 广西中医药大学