幽门螺杆菌四环素耐药与16SrDNA突变的关系

作者：文学琴; 吴芳草; 刘芳; 朱键; 胡越; 雷静静; 王彩霞; 陈相好; 崔古贞; 王琼; 印琳; 陈峥宏^*; 谷俊莹^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(04): 433-438.

DOI：10.13350/j.cjpb.190413

• 幽门螺杆菌
• 四环素
• 耐药性
• 基因突变
• 自然转化

目的了解贵州地区近年来人感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对四环素的耐药性及其16SrRNA基因突变情况,分析两者的相关性。方法采用琼脂稀释法对194株临床Hp菌株进行四环素药物敏感性试验;分析儿童感染株及成人感染株四环素耐药性差异;选取14株Hp四环素耐药株和14株四环素敏感株及质控株Hp26695进行16SrRNA基因片段PCR扩增与测序,与GenBank中Hp相关序列进行比对分析;选取四环素耐药株H64 PCR扩增16SrRNA基因后自然转化入受体菌Hp 26695,并用四环素药物平板(2μg/ml)筛选耐药克隆,对耐药的单克隆菌株进行16SrRNA基因片段PCR扩增与测序,并与供体菌、受体菌、GenBank中Hp ATCC26695的16SrRNA基因进行比对分析。结果 194株Hp中四环素耐药菌株32株,耐药率为16.49%。其中儿童分离菌株四环素耐药率为18.75%(6/32),成人分离株四环素耐药为16.05%(26/162),两组耐药率比较差异无统计学意义(χ2=0.141,P>0.05)。对随机选择的14株耐药菌、14株敏感菌及质控株Hp26695进行16SrRNA基因片段测序分析,耐药株和敏感株共有突变位点有6个,分别为T809C、811+C、872+C、C989T、T1082C、T1103C;有3株耐药株存在与四环素耐药相关的A926C或A926G单碱基突变。经过自然转化,共培养出9个四环素耐药单克隆。将各单克隆转化菌和供体菌H64及受体菌26695的16SrRNA基因序列与GenBank中Hp ATCC26695比对,9株单克隆转化菌和供体菌H64一致,均存在A926G、T1082C、T1103C突变。此外,受体菌26695、供体菌H64及转化菌株均存在T809C、811+C、872+C碱基突变,有4株转化菌分别存在与供体菌H64不一致T1103C和C724T自发突变。结论本实验分离的贵州地区人感染Hp对四环素的耐药率较全国Hp四环素平均耐药率(8.8%)偏高;贵州地区四环素耐药菌株和敏感菌株16SrDNA均存在突变;T809C、811+C、872+C、T1082C、T1103C为贵州地区Hp常见的自发突变,与四环素耐药无关,而A926G突变与本地区四环素耐药相关;Hp四环素耐药还存在16SrDNA突变之外的机制。

• 单位
  贵航贵阳医院; 基础医学院; 贵州医科大学