新基因Betatrophin原核重组蛋白表达及纯化

作者：周春芳; 马石楠; 陈云; 李东升; 于莉; 王小莉; 郭兴荣

来源：贵州医药, 2017, 41(05): 454-561.

• h-Betatrophin
• 载体构建
• 蛋白表达
• 蛋白纯化

目的构建人Betatrophin基因(h-Betatrophin)原核表达载体,诱导Betatrophin重组蛋白表达及纯化,为制备Betatrophin蛋白多克隆抗体及其功能研究打下基础。方法体外克隆Betatrophin cDNA序列,酶切后连接到PET32a(+)原核表达载体上,构建重组载体h-Betatrophin-PET 32a,然后转入大肠杆菌BL 21(DE 3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色及Western blotting检测蛋白表达情况,然后用Ni-NTA His·BindResin纯化目的蛋白。结果成功构建Betatrophin基因原核表达载体,诱导表达Betatrophin重组蛋白表观分子量正确,经纯化后可以得到纯度较高的Betatrophin重组蛋白。结论重组载体h-Betatrophin-PET 32a转入大肠杆菌BL 21后通过诱导及纯化可获取到纯度很高的Betatrophin重组蛋白,为后期研究Betatrophin基因功能奠定基础。

• 单位
  湖北医药学院; 湖北医药学院附属太和医院