牛分枝杆菌cfp10-esat6-cfp7融合基因的原核表达及抗原反应性分析

作者：**宁; 方诗文; 刘思怡; 包艳红; 姚宇; 黄永顺; 王春芳; 姜秀云^*; 马红霞^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2020, (22): 71-76.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.12.0353

• 牛分枝杆菌
• cfp10基因
• esat6基因
• cfp7基因
• 融合基因
• 原核表达

为了增强单个蛋白在牛结核病诊断中的敏感性和抗感染中的免疫原性,试验采用重叠延伸PCR将牛分枝杆菌cfp10基因与esat6基因融合,得到cfp10-esat6融合基因,再行重叠延伸PCR将cfp10-esat6融合基因与cfp7基因融合,得到融合基因cfp10-esat6-cfp7,并克隆至T-Vector pMD19中,构建重组质粒pMD-cfp10-esat6-cfp7。对pMD-cfp10-esat6-cfp7和pET-28a(+)进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将纯化的cfp10-esat6-cfp7连接到pET-28a(+)中,获得表达质粒pET-cfp10-esat6-cfp7,通过IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达质粒在E.coli BL21(DE3)中的表达情况。对表达的融合蛋白进行镍柱纯化,通过Western-blot和间接ELISA分析其抗原反应性。结果表明:获得了融合基因cfp10-esat6-cfp7,表达了约36.3 ku的融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7。融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7与10份牛结核阳性血清反应的OD492值均在0.6以上,而融合蛋白CFP10-ESAT6与阳性血清反应的OD492值在0.1～0.3之间;融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7与10份牛结核阴性血清的OD492值也明显高于CFP10-ESAT6,其与牛结核阳性血清呈现良好的反应性。说明CFP10-ESAT6-CFP7融合蛋白具有作为牛结核病诊断抗原用于新型疫苗研究的潜在价值。

• 单位
  长春科技学院; 动物科技学院; 吉林农业大学; 生命科学学院