年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中miR200a、SIRT1的表达对上皮细胞凋亡的影响

作者：赵香^*; 肖博文; 曹维; 刘莉静

来源：国际生物医学工程杂志, 2023, 46(06).

• 白内障
• 晶状体
• 上皮细胞
• 细胞凋亡

目的探讨年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中微小RNA200a(miR200a)、沉默调节蛋白1(SIRT1)的表达对上皮细胞凋亡的影响。方法选取2022年1～8月在南开大学附属北辰医院眼科门诊年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜标本30例作为白内障组, 另选取同期角膜移植正常晶状体前囊膜标本30例为对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测白内障组和对照组中miR200a和SIRT1基因的表达水平。将人晶状体上皮细胞SRA01/04分为阴性对照组、miR200a过表达组和miR200a抑制组, 分别转染阴性对照物、miR200a过表达质粒和miR200a抑制物。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测氧化应激因子水平, 通过流式细胞仪检测细胞凋亡率, 和通过流式细胞仪检测细胞凋亡率, 使用Western Blot检测SIRT1蛋白和各组细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达, 采用双荧光素酶报告基因检测法验证miR200a与SIRT1的靶向关系。结果与对照组相比, 白内障组miR200a基因表达水平升高(P<0.01), SIRT1基因表达水平降低(P<0.01)。与对照组相比, 白内障组SOD、GSH、GSH-Px水平均降低(均P<0.01), MDA水平升高(P<0.01)。与阴性对照组比较, miR200a过表达组细胞凋亡率升高(P<0.05), miR200a抑制组细胞凋亡率降低(P<0.05)。与阴性对照组比较, miR200a过表达组细胞SIRT1蛋白水平降低(P<0.05), miR200a抑制组细胞SIRT1蛋白水平升高(P<0.05)。与阴性对照组比较, miR200a过表达组Caspase-3活性和Bax蛋白表达水平均升高(均P<0.05), 而Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);与阴性对照组比较, miR200a抑制组Caspase-3活性和Bax蛋白表达水平均降低(均P<0.05), 而Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。miR200a过表达组可明显抑制野生型SIRT1质粒的荧光素酶活性, SIRT1基因是miR200a的作用靶基因。结论年龄相关性白内障患者晶状体囊膜中miR220a基因呈高表达, 其机制可能是miR220a基因通过靶向调控SIRT1基因的表达促进晶状体上皮细胞凋亡。

• 单位
  南开大学