体外百草枯染毒后神经干细胞的分化特点

作者：熊贵娅; 赵利娜; 左真子; 周志俊; 常秀丽^*

来源：环境与职业医学, 2019, 36(10): 903-908.

DOI：10.13213/j.cnki.jeom.2019.19328

• 百草枯
• 神经干细胞
• 分化
• 农药
• 除草剂

[背景]百草枯(PQ)作为一种广泛使用的除草剂,其神经发育毒性及机制尚未完全明确,且针对PQ对神经干细胞分化影响的研究较少。[目的]研究PQ对神经干细胞分化趋势的影响,并探究神经干细胞分化结局良好的观察时点。[方法]分离提取新生C57BL/6小鼠侧脑室下区原代神经干细胞(mNSCs)进行体外培养,使用0、10、20、40μmol/L浓度PQ处理m NSCs 24 h后,采用MTT法检测细胞活力,并用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)生成。PQ处理mNSCs 24 h后,更换不含PQ的分化培养基持续培养5 d,分别在培养1、3、5 d后镜下观察细胞分化状态,用免疫荧光检测PQ处理对mNSCs分化成神经元及星形胶质细胞的影响。[结果]当PQ浓度为40μmol/L时,细胞活力下降到对照组的86%,且ROS水平升高至对照组的1.67倍(P <0.05)。m NSCs分化3 d后出现明显的细胞分层,经免疫荧光鉴定可知上层主要为神经元细胞。分化5 d后,上层细胞已经长出明显的神经突起样结构,而细胞数量较分化3 d后检测结果无肉眼可见差异。采用免疫荧光方法计数分化后的各种细胞数量,发现随着PQ染毒剂量的增加,神经元细胞比例呈现逐渐下降的趋势,且神经元与星形胶质细胞生成比也呈现逐渐降低的趋势,当PQ浓度为20、40μmol/L时差异有统计学意义(P <0.05)。[结论]PQ可抑制原代培养的mNSCs向神经元方向的分化,这种作用可能与PQ诱导细胞氧化应激相关。体外培养的mNSCs分化5 d可作为良好的研究干细胞分化的时点。

• 单位
  公共卫生安全教育部重点实验室