基于不同基因型的中国莱姆病螺旋体菌株标准化研究

作者：段立科; 侯学霞; 张琳; 郝琴^*

来源：疾病监测, 2023, 38(12): 1453-1459.

• 莱姆病螺旋体
• 莱姆病
• 基因型
• 标准菌株

目的 建立莱姆病螺旋体中国株5种基因型(巴伐利亚疏螺旋体、伽氏疏螺旋体、阿弗西尼疏螺旋体、狭义伯氏疏螺旋体和扬子疏螺旋体)的标准菌株，为菌株鉴定、诊断试剂和疫苗研发提供基础。方法 依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812-2022)，针对中国莱姆病螺旋体5种主要基因型，选取5株菌株(PD91、MD86、FP1、CS4和QXS13)。首先接种到BSKⅡ培养基中培养，暗视野显微镜下观察菌株的形态学特点。提取全基因组DNA，聚合酶链式反应扩增莱姆病螺旋体5S～23S rRNA基因间隔区并测序，将每株菌株不同代次培养物的产物序列分别进行比对分析。随后使用多位点序列分析(MLSA)方法鉴定菌株基因型，同时将不同代次菌株MLSA聚类分析结果进行比对，验证菌株遗传学稳定性。通过Illumina NovaSeq平台进行全基因组测序分析菌株基因组特征。结果 5株菌株均具有莱姆病螺旋体典型形态学特征。经特异性基因检测及MLSA分型鉴定，依次为巴伐利亚疏螺旋体(PD91),伽氏疏螺旋体(MD86),阿弗西尼疏螺旋体(FP1),狭义伯氏疏螺旋体(CS4)和扬子疏螺旋体(QX-S13)基因型，聚类分析显示与相应基因型国际参考菌株位于同一分支。稳定性实验结果显示5株菌株不同代次培养物5S～23S rRNA基因间隔区序列相似性达到100.00%,5株菌株10代次和20代次培养物MLSA聚类分析结果一致，遗传学稳定性良好。全基因组测序结果显示，基因组大小为1.26Mbp～1.80 Mbp,G+C含量为27.63%～28.20%，基因组功能和生物代谢模块分布基本相同，主要为维持细菌生长、繁殖、运动和应激等相关成分。结论 PD91、FP1、MD86、CS4和QXS13共5株菌株具有莱姆病螺旋体典型生物学、形态学特征，基因型及分子特征稳定，可作为中国莱姆病螺旋体5种基因型的标准菌株。本研究可为建立中国莱姆病螺旋体标准化菌株体系提供基础，同时为菌株鉴定、莱姆病诊断试剂和疫苗研发提供相关资源。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所