抑制MDSC对神经母细胞瘤荷瘤小鼠CXCL12/CXCR4表达影响及在免疫治疗中的作用

作者：徐伟立^*; 李索林; 李萌; 周辉; 耿娜; 杨晓锋

来源：中华小儿外科杂志, 2019, (01): 58-63.

• 神经母细胞瘤
• 肿瘤微环境
• 趋化因子CXCL12
• 受体CXCR4
• 小鼠
• 髓系抑制性细胞

目的 了解抑制神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)荷瘤小鼠体内髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)对趋化因子12(cxc chemokine receptor ligand 12,CXCL12)及趋化因子受体4(cxc chemokine receptor type 4,CXCR4)表达影响及其在免疫治疗中的作用,探索控制NB生长和转移的新方法。方法 采用SK-N-SH细胞接种法建立神经母细胞瘤BALB/c荷瘤小鼠模型,成瘤后切取标本,HE染色观察肿瘤组织结构。将荷瘤小鼠按随机数字表法分为对照组、生理盐水(NS)组、多柔比星(doxorubicin,DOX)2.5 mg/kg组、DOX 5 mg/kg组和多巴胺(dopamine,DA)50 mg/kg组,每组30例。在肿瘤细胞接种后7 d和12 d,分别按相应剂量对各组实施NS、DOX或DA鼠尾静脉注射,对照组不实施任何干预。于接种后14、17、23 d,分离检测,对比各组小鼠脾脏、骨髓和肿瘤中MDSC数量比例和凋亡率；比较各组肿瘤生长曲线有无差异。同期采用免疫组织化学(MaxVision)法检测对比各组瘤体、瘤旁、瘤远及瘤旁淋巴结组织中CXCL12及CXCR4表达。对各组肿瘤大小、瘤体MDSC比例与CXCL12/CXCR4表达进行相关性分析。制备肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),实施荷瘤小鼠免疫治疗对比实验。荷瘤小鼠按随机数字表法分为对照组、DOX2.5 mg/kg组、CTL组、DOX2.5 mg/kg+CTL组,每组30例。比较各组肿瘤生长曲线有无差异。采用SPSS22.0软件进行统计学处理。结果 各用药组在肿瘤、骨髓和脾脏组织中MDSC比例均受到不同程度抑制,依次为DOX2.5组>DOX5组>DA组>对照组(P<0.05)。但各组织在不同药物刺激下MDSC凋亡率均无统计学意义(P>0.05)。各组肿瘤生长曲线比较可见DOX2.5组和其他各组间均存在统计学意义(P=0.000)。瘤体、瘤旁和淋巴组织中CXCL12和CXCR4表达较瘤远组织为高,以瘤体中表达最高。不同用药组瘤体中CXCL12和CXCR4表达均受到抑制,以DOX2.5组受抑最为显著(P=0.018,P=0.000)。各组肿瘤体积和MDSC比例、CXCL12/CXCR4均存在正相关(rs=0.904；rs=0.907；rs=0.579)。不同免疫治疗组肿瘤体积比较,除CTL组和DOX2.5组之间差异无统计学意义外,其他各组间差异均存在统计学意义。结论 小剂量DOX应用可有效抑制NB荷瘤小鼠体内MDSC,继而同步抑制CXCL12及其受体CXCR4表达,提高效应细胞杀伤效果,有效控制肿瘤生长和转移。

• 单位
  河北医科大学第二医院