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摘要
目的探讨异紫堇碱(ICD)对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。方法采用不同浓度(25、50、100、200 μmol/L)ICD处理宫颈癌SiHa细胞(简称ICD处理组), 同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照(NC)组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测细胞的增殖抑制率, 细胞克隆形成实验检测ICD对细胞辐射敏感性的影响, Western blot检测磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的相对表达量, 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测微小RNA-129-5p(miR-129-5p)的表达。在SiHa细胞中分别转染miR-NC和miR-129-5p, 观察转染miR-129-5p对细胞增殖、辐射敏感性、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、γ-H2AX蛋白表达的影响。在SiHa细胞中分别转染anti-miR-NC和anti-miR-129-5p并使用ICD处理, 分析其对ICD诱导的细胞增殖、辐射敏感性、PI3K/Akt信号通路的影响。2组间数据的比较采用独立样本t检验。结果 MTT实验结果显示, 与NC组SiHa细胞的增殖抑制率[(0.05±0.01)%]相比, 25、50、100、200 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[(10.26±1.03)%、(22.16±2.21)%、(44.09±4.41)%、(70.88±7.09)%], 且差异均有统计学意义(t=29.736～30.013, 均P<0.05)。细胞克隆形成实验、Western blot和qRT-PCR结果显示, 与NC组相比, 100 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞对不同剂量X射线的辐射敏感性(t=19.135～44.478, 均P<0.05), 提高γ-H2AX蛋白和miR-129-5p的相对表达量(t=15.041、19.682, 均P<0.05), 降低p-PI3K和p-Akt蛋白的相对表达量(t=14.897、15.429, 均P<0.05)。与转染miR-NC组相比, 转染(高表达)miR-129-5p组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[(75.06±7.51)%对(1.04±0.10)%, t=29.566, P<0.05]、对不同剂量X射线的辐射敏感性(t=13.239～37.015, 均P<0.05)和γ-H2AX蛋白的相对表达量(t=17.076, P<0.05), 能够降低cyclinD1蛋白的相对表达量(t=17.393, P<0.05)。与转染anti-miR-NC+ICD处理组相比, 转染anti-miR-129-5p(低表达miR-129-5p)+ICD处理组可以反转ICD抑制SiHa细胞增殖、抑制PI3K/Akt信号通路的活性和增强细胞辐射敏感性的作用, 且差异均有统计学意义(t=13.370～28.252, 均P<0.05)。结论 ICD能够通过上调miR-129-5p表达及抑制PI3K/Akt信号通路的活性来抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖以及增强其辐射敏感性。
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