核酸内切酶改良型彗星实验用于检测遗传毒物致DNA氧化损伤

作者：赵健; 李红丽; 翟庆峰; 邱玉刚; 牛勇; 戴宇飞; 郑玉新; 段化伟

来源：中华预防医学杂志, 2014, 48(03): 208-212.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2014.03.011

• 诱变剂
• DNA
• 核酸内切酶
• 氧化损伤
• 彗星实验

目的建立核酸内切酶改良型体外彗星实验方法,并应用该方法检测DNA氧化损伤。方法分别应用苯并[a]芘[B(a)P,20μmol/L]、甲基磺酸甲酯[MMS,25μg/ml]、秋水仙素(COL,5 mg/L)和长春新碱(VCR,0.5 mg/L)处理人支气管上皮(16HBE)细胞。采用噻唑蓝(MTT)实验评估细胞生存率,常规彗星实验和内切酶改良型彗星实验分别检测DNA损伤和氧化损伤,流式细胞术检测细胞内活性氧改变。结果 MTT实验显示,B(a)P、MMS、COL、VCR染毒后可引起较高水平的细胞内活性氧升高,4个组的细胞生存率分别为:(59.69±2.60)%、(54.33±2.81)%、(53.11±4.00)%、(51.43±3.92)%。常规彗星实验及甲酰胺嘧啶-DNA-糖基化(formamidopyrimidine-DNAglycosylase,FPG)酶彗星实验均检测到B(a)P、MMS、COL、VCR引发的DNA损伤。FPG酶彗星实验中,Olive尾矩改变最明显,缓冲液组的B(a)P、MMS、COL、VCR组Olive尾矩分别为22.99±17.33、31.65±18.86、19.86±9.56和17.02±9.39,FPG酶处理后Olive尾矩分别为34.50±17.29、43.80±10.06、33.10±12.38和28.60±10.53,较缓冲液组分别增加58.94%、38.48%、66.86%和68.21%(t值分别为3.91、3.89、6.66和3.87,P值均<0.05)。相关性分析显示,Olive尾矩与细胞内活性氧也有较好的相关性(r=0.77,P<0.05)。结论 FPG酶改良型彗星实验可以有效的检测遗传毒物所致的DNA氧化损伤改变。

• 单位
  潍坊医学院; 中国疾病预防控制中心; 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所; 公共卫生学院