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摘要
为优化杏鲍菇GIM5.344原生质体的制备、再生条件及建立稳定有效的遗传转化体系，对裂解酶、酶解温度、酶解时间、再生培养基稳渗剂等原生质体制备、再生条件以及潮霉素浓度、聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）介导转化方法进行优化，探究不同原生质体制备、再生条件对原生质体产量和再生率的影响。结果表明：选用溶壁酶1进行酶解效果最佳，当酶解温度30℃、酶解时间2 h、再生培养基稳渗剂为甘露醇时，原生质体的产量可达到7×108CFU/mL，再生率达到0.40%。得到转化子最多的转化方法为固体预培养+双层培养法，即PEG介导转化后在无抗性再生培养基上28℃预培养48 h，然后再添加一层含有30μg/mL潮霉素的培养基进行拟转化子的筛选。所得转化子中的绿色荧光蛋白基因能稳定有效表达。
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