虎奶菇Mn-SOD提取、鉴定及基因的克隆

作者：杨加亮; 田云恒; 马爱民^*

来源：食品工业科技, 2020, 41(15): 150-157.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2020.15.024

• 虎奶菇
• 锰超氧化物歧化酶
• 酶活
• 同源克隆
• 融合引物与巢式PCR

以虎奶菇菌丝为材料,提取、鉴定了虎奶菇锰超氧化物歧化酶,克隆虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因。用液氮研磨、超声、硫酸铵沉淀和透析等方法提取虎奶菇Mn-SOD; WST-8法测定虎奶菇Mn-SOD酶活力; H2O2鉴定虎奶菇SOD的类型;用同源克隆、cDNA末端快速扩增技术和融合引物与巢式PCR等方法从虎奶菇中克隆锰超氧化物歧化酶基因。结果表明,虎奶菇Mn-SOD酶活力为1.66个酶活力单位。酶经过H2O2处理后仍然有活性,与未处理无明显差异,表明虎奶菇中SOD主要是Mn-SOD。克隆获得了虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因PtMn-SOD,其DNA序列全长1025 bp,开放阅读框全长为663 bp,编码220个氨基酸。序列分析与系统进化树表明,PtMn-SOD与属于侧耳属的糙皮侧耳(登录号:MH645359.1)关系较近。预测该蛋白质分子量为24.54 kDa,蛋白等电点为7.86。PtMn-SOD蛋白定位于线粒体,在线粒体中发挥功效。

• 单位
  华中农业大学