盖塔病毒TaqMan RT-qPCR检测方法的建立与评价

作者：吴天元; 付士红; 殷启凯; 赵洁荣; 李樊; 何英; 许松涛; 梁国栋; 聂凯^*; 杨光^*; 王环宇^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2021, 35(02): 205-208.

DOI：10.3760/cma.j.cn112866-20200120-00011

• 盖塔病毒
• TaqMan
• 实时荧光定量RT-PCR
• 分子诊断

目的建立一种灵敏且特异的实时荧光定量RT-PCR方法, 用于快速检测盖塔病毒(getah virus, GETV)。方法从GenBank数据库下载GETV基因序列, 使用Clustal X完成序列比对, 针对高保守区段设计特异性引物和探针;以GETV核酸为标准品建立标准曲线, 分别对检测反应的灵敏度、特异性和稳定性进行评价。结果本方法能特异地检测GETV, 与多种虫媒病毒无交叉反应;灵敏度为1.0×10 pfu/ml, 批内和批间变异系数均小于1%。从湖南、河北、福建、重庆采集的196批蚊虫中检出1批GETV阳性。结论建立了灵敏度高, 特异性强的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法用于GETV筛查。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 传染病预防控制国家重点实验室; 暨南大学; 公共卫生学院