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摘要
遗传转化体系对植物基因功能的验证具有重要意义，为在甘薯（Ipomoea batatas L.）中建立发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）介导的遗传转化体系，本研究采用3×3×5三因素试验设计研究发根农杆菌侵染时间、外植体类型、发根农杆菌菌株对甘薯毛状根诱导率的影响。确定合适的外植体类型、侵染时间，在此基础上采用5×5双因子设计，研究5种发根农杆菌菌株和甘薯品种（系）对甘薯发根诱导率的影响。用PCR技术检测诱导出的毛状根，证实了发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已经整合到甘薯细胞基因组中。结果表明，发根农杆菌侵染时间、外植体类型、发根农杆菌菌株、甘薯品种均影响发根诱导率，且各因子间存在交互作用。最适宜发根的外植体为茎段，最佳侵染时间是20 min，‘徐薯22’适宜菌株为MSU440，‘泰中6号’适宜菌株为K599，‘1610’适宜菌株为C58C1，‘YS’适宜菌株为K599，‘灰薯’适宜菌株为C58C1。采用发根农杆菌菌株MSU440，以‘徐薯22’茎段为外植体、农杆菌侵染20 min，最高获得了79.63%的毛状根诱导率。构建过表达载体进行毛状根遗传转化，通过目的基因的PCR扩增发现甘薯毛状根的转基因效率为38.1%。建立了发根农杆菌介导的甘薯遗传转化体系，为甘薯进一步的转基因育种奠定基础。
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