TNF-α增强人脐带间充质干细胞条件培养基的体外造血支持功能

作者：胡彩东; 韩之波; 杨舟鑫; 李丽娜; 罗伟峰; 及月茹; 王有为; 李扬秋; 韩忠朝

来源：中国病理生理杂志, 2013, 29(09): 1679-1684.

• 间充质干细胞
• 肿瘤坏死因子α
• 造血支持

目的:研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)刺激后所得的脐带间充质干细胞条件培养基对脐血CD34+细胞在半固体培养基中集落形成个数及种类的影响。方法:将3～6代人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)以2×106接种到75cm2培养瓶中,其中刺激组加入TNF-α(10 g/L),48 h后收集上清作为条件培养基。Real-time PCR检测hUC-MSCs中各类造血因子mRNA的表达量。密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,磁珠分选CD34+细胞,流式细胞术检测细胞纯度后分5组接种到6孔板内:TNF-α刺激hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;TNF-α+DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基;完全甲基纤维素培养基;DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基。10 d后显微镜下计数各类集落形成单位(colony-forming unit,CFU)的数目,收集集落形成细胞,流式细胞术检测其表型特征。结果:(1)TNF-α刺激后hUC-MSCs中粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA表达上调。(2)两种条件培养组均可见粒系CFU(granulocyte CFU,CFU-G)、巨噬系CFU(macrophage CFU,CFU-M)和粒巨噬系CFU(granulocyte-macrophage CFU,CFU-GM),但TNF-α刺激组CFU-G和CFU-M的数目约为未刺激组的1.5倍,CFU-GM约为未刺激组的2倍;阳性对照组中除粒系、巨噬系集落外还可见红系集落;而DMEM/F12完全培养基加或不加TNF-α组10 d后均未见集落形成。(3)流式细胞术检测TNF-α刺激组与未刺激组集落细胞表型CD14、CD45和CD11b,未见明显差异。结论:hUC-MSC上清作为条件培养基可在体外促进CD34+细胞分化增殖为髓系细胞,具有造血支持作用,TNF-α刺激后此作用增强。

• 单位
  中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学技术研究中心; 实验血液学国家重点实验室; 暨南大学; 北京协和医学院