摘要
根据GenBank中犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)已有基因序列设计其对应引物,通过对反应体系和扩增程序的优化,建立了CCoV和CPV双重荧光定量PCR检测方法,评估了其敏感性、特异性和重复性。结果显示,该方法最佳退火温度为60℃,引物浓度分别为CCoV 1.0 μmol/L和CPV 0.1 μmol/L,检测下限均为102 copies/μL。批内与批间的变异系数均小于2%。该方法用于检测犬腺病毒(CAV)、犬圆环病毒(CaCV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬流感病毒(CIV)、犬副流感病毒(CPIV)均无特异性扩增。对68份临床样品的检测,结果表明CCoV阳性率为22.0%,CPV阳性率为61.8%,与普通PCR检测结果相比,本研究建立的方法更加灵敏。本研究建立的CCoV和CPV检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,可用于对CCoV和CPV的鉴别诊断。
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