miR-375启动子甲基化在MIN6细胞中存在状况的研究

作者：高敏; 尹亮; 况雪梅; 常向云^*

来源：安徽医科大学学报, 2020, 55(01): 60-64.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.01.013

• 2型糖尿病
• miR-375
• DNA去甲基化
• 基质辅助激光解析电离时间飞行质谱仪

目的该文旨在运用MassARRAY平台分析小鼠胰岛β细胞系(MIN6)的DNA甲基化谱,并应用DNA去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理MIN6细胞以探索甲基化模式的改变。方法运用MassARRAY平台检测MIN6细胞系与小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)中miR-375基因DNA甲基化状态,并检测不同浓度5-Aza-CdR溶液处理MIN6细胞系后miR-375基因甲基化状态,评估其变化。应用噻唑蓝比色法(MTT)检测5-Aza-CdR对MIN6细胞的生长增殖的影响。使用qRT-PCR检测5-Aza-CdR 50μmol/L浓度组miR-375在MIN6细胞中和未处理的NIH3T3细胞中的表达。结果 5-Aza-CdR能抑制MIN6细胞的生长。用5-Aza-CdR处理24、48、72 h后,2μmol/L浓度组与其他各组比较,OD值均不同(P<0.05),且不同时间点之间进行比较差异有统计学意义(P<0.05)。经24、48、72 h,用不同浓度的5-Aza-CdR处理MIN6细胞后,各组mmu-miR-375的DNA均高度甲基化,50μmol/L组miR-375 DNA的平均甲基化率均低于其他组。检测出50μmol/L组5-Aza-CdR处理的MIN6细胞经24、48、72 h后,mmu-miR-375的表达高于0μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。MIN6细胞mmu-miR-375基因的DNA表达低于NIH3T3细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论该研究首次运用MassARRAY平台分析mmu-miR-375启动子甲基化水平,并发现在MIN6细胞中存在mmu-miR-375 DNA广泛甲基化修饰。

• 单位
  石河子大学; 石河子大学医学院第一附属医院