E3泛素连接酶RNF165在A亚群禽白血病病毒复制中的作用

作者：王兴明; 王后坤; 陈雪阳; 方春; 梁雄燕; 杨玉莹^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(09): 3781-3789.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.09.034

• 环指蛋白165
• A亚群禽白血病病毒(ALV-A)
• 病毒复制
• 功能结构域突变

【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用，为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡，通过Western blotting和实时荧光定量PCR方法分别从体外和体内两个方面验证ALV-A对宿主RNF165表达的影响；参考已公布的RNF165基因序列设计过表达引物，通过PCR扩增RNF165基因，将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1;将验证表达的重组质粒转染DF-1细胞，1 d后接种ALV-A,使用Western blotting检测过表达RNF165对病毒复制的影响；最后设计突变引物，构建RNF165功能结构域突变质粒，将过表达质粒和突变质粒分别转染DF-1细胞，1 d后接种ALV-A,Western blotting测定gp85蛋白表达差异。【结果】ALV-A感染DF-1细胞后未能检测到内源性的RNF165蛋白，但基因转录水平较对照组明显下调(P<0.01)。在体内试验中，与对照组相比，感染病毒雏鸡肝脏中RNF165基因和蛋白表达水平均有所下调(P<0.01);通过PCR成功扩增到大小为1 068 bp的目的片段并成功克隆至pcDNA3.1,Western blotting结果显示，在39 ku处出现目的条带，RNF165过表达后促进了病毒复制；测序结果显示，成功构建出功能结构域突变质粒，与过表达质粒组相比，RNF165突变质粒组病毒的复制水平受到显著抑制。【结论】ALV-A感染抑制DF-1细胞和雏鸡肝脏RNF165的表达，在体外试验中，过表达RNF165会促进ALV-A的复制，且这种影响与其保守结构域有关。

• 单位
  动物科学学院; 长江大学; 荆州职业技术学院