应用液态悬浮芯片技术建立肝癌血清标志物蛋白GP73的检测方法

作者：吴云; 王一鹏; 马杰; 张永宏; 孙焕芹; 孙坚萍; 王子康; 徐杰; 代艳超; 李宁^*

来源：中华肿瘤杂志, 2019, 41(05): 351-356.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253?3766.2019.05.006

• 肝细胞癌
• 高尔基体糖蛋白73
• 抗体筛选
• 液态芯片

目的构建高尔基体糖蛋白73(GP73)的液态芯片检测体系并评价其检测性能。方法制备并纯化5株抗GP73的单克隆抗体, 采用酶联免疫吸附试验双抗夹心法进行抗体配对筛选。应用筛选到的抗体对构建Luminex液态芯片检测体系, 并对该检测体系进行分析性能评估。应用该体系检测正常对照、慢性乙型肝炎和肝细胞癌血液样本各30例, 比较3组间GP73浓度的差异。结果制备并纯化了5株抗GP73单克隆抗体, 配对筛选成功5对。应用8F10D1和10B9F11抗体对成功构建了GP73的Luminex液态芯片检测体系。该检测体系的灵敏度为0.25 ng/ml, 线性检测范围为0.25～100 ng/ml, 特异度较好, 批内精密度<8%, 批间精密度<9%, 回收率为83%～92%, 线性稀释效应的线性回归方程为y=1.141x+6.436(r2=0.998 4, P<0.001)。正常对照组、慢性乙肝组和肝细胞癌组血液样本的GP73浓度分别为42.8(38.68, 55.90)ng/ml、61.49(43.59, 81)ng/ml和122.78(49.36l, 264.55)ng/ml。肝细胞癌组的GP73浓度高于慢性乙肝组和正常对照组(均P<0.05), 慢性乙肝组的GP73浓度高于正常对照组(P<0.05)。结论成功构建了GP73的液态芯片检测体系, 为GP73检测在临床上的应用奠定了基础。

• 单位
  首都医科大学附属北京妇产医院; 首都医科大学附属北京佑安医院; 北京青元盛康生物医药科技有限公司