利用真空渗透和CRISPR/Cas9系统获得非转基因菜薹突变体

作者:宗梅; 韩硕; 郭宁; 段蒙蒙; 刘凡; 王桂香*
来源:生物技术通报, 2022, 38(10): 159-163.
DOI:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2022-0042

摘要

通过CRISPR/Cas9基因编辑系统获得非转基因菜薹突变体,实现CRISPR/Cas9体系在菜薹原位转化中的应用,为无选择标记的基因编辑技术应用提供参考。以‘49菜心’为试材,番茄红素脱氢酶基因(PDS)为靶基因,采用真空渗透原位转化方法,转化菜薹25株。结果表明,在2 032株原位转化种子苗中鉴定出3株发生PDS基因编辑,其中1株有外源转化载体插入,PDS发生杂合编辑,表型与野生型一致。另外2株具有矮化和失绿表型,且基因组无外源载体片段插入,PDS发生不同类型的敲除突变。CRISPR/Cas9通过不依赖组织培养的原位转化可以在菜薹中实现基因编辑,并能直接获得无外源插入的非转基因编辑突变体。

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