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摘要
采用代谢工程方法强化恶臭假单胞菌利用木质素积累PHA的能力,为提高木质素转化效率和PHA的高效、低成本生产提供研究思路和技术基础。将PHA解旋酶编码基因phaZ的上下游片段插入pK18mobsacB,构建了敲除载体pK18PHAC1C2;将来源于R. jostii RHA1的过氧化物酶编码基因dypB插入pVLT33,构建了表达载体pVLTpelBDYPB。以P. putida QSR1为出发菌株,利用同源重组的方法敲除了木质素解旋酶编码基因phaZ;进而通过异源表达的方法在该突变株中引入过氧化物酶DyPB;分析各基因修饰菌株的生长情况和PHA积累量。成功构建了phaZ基因缺失突变株P. putida QSRZ6和DyPB表达菌株P. putida QSRZ6B。在限制氮源的情况下,以葡萄糖为碳源培养48 h,与出发菌株QSR1相比,QSRZ6的生长量和PHA积累量分别提高了29%和80%。在以木质素为碳源积累PHA的过程中,与QSR1相比,QSRZ6的生长量和PHA积累量分别提高了48%和182%;与QSRZ6和QSR1相比,QSRZ6B的PHA积累量分别提高了13%和218%,达到了140 mg/L。phaZ基因的缺失和异源表达过氧化物酶使菌株利用木质素积累PHA的能力得到增强,表明代谢工程是一种有效的调控木质素转化和PHA积累的有效方法。
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