SIRT2去乙酰化酶活性位点突变体的构建及活性鉴定

作者：朱蕊; 武幸濡; 邸杰; 许雅淇; 谭克^*; 樊玉梅^*

来源：生物技术, 2023, 33(02): 135-142.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.02.0020

• SIRT2
• 去乙酰化酶活性
• 重叠延伸PCR
• 分子克隆

[目的]构建人沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,SIRT2)的去乙酰化酶活性位点突变体，并验证其去乙酰化酶活性。[方法]设计合成人SIRT2的酶活性关键位点(Q167、N168和H187)突变基因PCR引物。利用重叠延伸PCR技术，获得hSIRT2突变基因。利用分子克隆技术构建hSIRT2突变体。利用Western Blot技术检测hSIRT2突变体的表达及其去乙酰化酶活性。[结果]成功获得了hSIRT2的168、187、167/168双位点和167/168/187三位点突变基因，片段大小为1 190 bp。所构建的突变基因重组质粒经DNA测序验证，显示成功插入。细胞内检测到清晰明确的突变体的表达信号。与野生型SIRT2相比，突变体的去乙酰化酶活性具有不同程度的改变。[结论]成功构建了hSIRT2的4种不同的去乙酰化酶活性位点突变体，其去乙酰化酶活性有不同程度降低。

• 单位
  生命科学学院; 河北师范大学