微小RNA-21-5p拮抗Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的分子机制

作者：覃松; 陈淼; 戢慧; 刘国跃; 陈涛; 李康; 梅鸿

来源：中华危重病急救医学, 2015, 27(07): 574-578.

DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-4352.2015.07.007

• 肺泡上皮细胞,Ⅱ型
• 凋亡
• 微小RNA
• miR-21-5p
• 分子机制

目的通过腺病毒过表达微小RNA-21-5p(miR-21-5p)后转染Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ),观察其对过氧化氢(H2O2)诱导的AECⅡ细胞凋亡的影响,并探索其抗凋亡的分子机制。方法将传代培养的大鼠AECⅡ随机均分为4组:正常对照组(生理盐水)、H2O2损伤组(0.5 mmol/H2O2)、miR-21-5p过表达组(miR-21-5p腺病毒+0.5 mmol/L H2O2)、miR-21-5p阴性转染组(空腺病毒+0.5 mmol/L H2O2)。采用透射电镜及流式细胞仪分别检测细胞凋亡形态及早期凋亡率;取转染效率最高的时间点(6、12、24、48 h),采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AECⅡ内miR-21-5p表达水平,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞内Bcl-2、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达。结果①AECⅡ鉴定:荧光显微镜下可见AECⅡ的特征性结构(微绒毛及嗜锇性板层小体)。②细胞凋亡形态:透射电镜下可见AECⅡ胞质回缩,染色质凝聚、边聚,细胞表面微绒毛稀少,嗜锇性板层小体排空。③AECⅡ内miR-21-5p表达:48 h miR-21-5p腺病毒转染效率最高。miR-21-5p过表达组AECⅡ细胞中miR-21-5p表达量明显高于H2O2损伤组和miR-21-5p阴性转染组(A值:1.54±0.02比1.02±0.02、0.56±0.03、0.58±0.02,均P<0.05)。④细胞凋亡率:与正常对照组比较,H2O2损伤组、miR-21-5p阴性转染组和miR-21-5p过表达组细胞凋亡率均随损伤时间的延长逐渐升高。除损伤6 h外,miR-21-5p过表达组细胞凋亡率明显低于H2O2损伤组和miR-21-5p阴性转染组[12 h:(10.73±2.80)%比(16.26±0.59)%、(16.04±0.70)%,24 h:(16.00±3.44)%比(23.29±2.78)%、(23.58±2.31)%,48 h:(31.30±3.55)%比(50.53±2.17)%、(49.41±1.97)%,均P<0.05];miR-21-5p阴性转染组与H2O2损伤组各时间点比较差异均无统计学意义。⑤蛋白表达:miR-21-5p过表达组AECⅡ细胞Bax、caspase-3蛋白表达明显低于H2O2损伤组和miR-21-5p阴性转染组[Bax(A值):0.07±0.01比0.18±0.01、0.13±0.01,caspase-3(A值):0.07±0.01比0.23±0.01、0.12±0.01,均P<0.05],Bcl-2蛋白表达水平明显高于H2O2损伤组和miR-21-5p阴性转染组(A值:0.26±0.01比0.06±0.01、0.10±0.01,均P<0.05)。结论①miR-21-5p具有抗AECⅡ凋亡的作用。②腺病毒载体是转染AECⅡ的一种比较成功的基因转导载体。③miR-21-5p抗AECⅡ凋亡可能与下调Bax、caspase-3蛋白表达水平及上调Bcl-2蛋白表达水平有关。

• 单位
  遵义医学院附属医院