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摘要
目的 建立SYBR Green I染料法荧光RT-PCR方法，快速鉴别呼吸道合胞病毒A和B亚型，实现准确、简便、低成本分型检测。方法 比对175株呼吸道合胞病毒全基因序列，锁定N基因设计特异性引物，用SYBR Green I染料法荧光PT-PCR扩增A和B亚型呼吸道合胞病毒，通过熔解曲线分析，测定A、B亚型扩增产物的熔解温度；进行特异性、重复性和准确性评价。结果 熔解曲线分析显示，呼吸道合胞病毒A型和B亚型的扩增产物熔解温度相差较大，A亚型为（80.76±0.10）℃，B亚型为（79.00±0.09）℃。特异性试验表明，该方法能检测呼吸道合胞病毒A和B亚型，与甲/乙型流感病毒、新冠病毒、鼻病毒、副流感病毒、博卡病毒、偏肺病毒等呼吸道病毒没有交叉反应。重复性试验表明，该方法扩增呼吸道合胞病毒A和B亚型熔解温度变异系数均低于1%，重复性良好。对56份呼吸道合胞病毒核酸样本的检测结果与商品化TaqMan探针法分型试剂盒完全一致。结论 建立的SYBR Green I染料法荧光RT-PCR方法可快速检测呼吸道合胞病毒并鉴别A和B亚型。
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