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摘要
本研究旨在探究枸杞果实发育期4香豆酸：辅酶A连接酶(4CL)的活性、4CL基因相对表达量及类黄酮含量之间的关系。采用试剂盒测定枸杞果实五个发育时期(青果期， 绿果期， 变色期， 黄熟期， 红熟期) (M1～M5)的4CL酶活性，利用RT-qPCR方法测定了4CL基因的相对表达量，克隆了枸杞4CL基因(GenBank登录号: MW981504)，并利用基因原核系统表达了该目的基因。结果显示：枸杞果实发育期M1～M5，4CL酶活性和类黄酮含量都呈先下降后上升趋势，在变色期(M3)酶活性和类黄酮含量最低。枸杞4CL基因的全长cDNA序列为2 171 bp，ORF为1 716 bp，编码571个氨基酸。通过BLAST对比分析，该基因编码的氨基酸与番茄等茄科植物亲缘关系最近。枸杞4CL酶活性、类黄酮含量、4CL基因表达之间呈显著性相关关系(P<0.05)。通过构建原核表达载体对枸杞4CL基因进行原核表达分析与优化，发现加入IPTG后均可诱导枸杞4CL蛋白的表达，且随着培养温度的提高，蛋白表达量逐渐增加。结果表明：可通过调节枸杞4CL活性及4CL基因表达量，进而调控类黄酮的积累。
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