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摘要
目的:利用双重重组酶聚合酶扩增结合侧流层析技术(duplex recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD)建立了一种能快速可视化鉴定美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的检测方法。方法:以美人鱼发光杆菌特异性基因bamB及其美人鱼亚种特异性基因ureC为检测靶标基因,设计特异性RPA引物,建立双重RPA-LFD方法。结果:在bamB引物终浓度为400 nmol/L,ureC引物终浓度为400 nmol/L,反应温度为37℃,反应时间为15 min时,双重RPA-LFD方法扩增效率最高,且特异性好。检测灵敏度为101 CFU/mL。实际样品检测试验中,与qPCR法结果一致。结论:建立的双重RPA-LFD方法具有检测速度快、灵敏度高且检测结果可视等优点,从而为快速鉴定美人鱼发光杆菌及其亚种提供了准确有效的方法,在基层和现场检查中具有较好的应用前景。
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单位中国计量大学; 生命科学学院
