hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白在DG44细胞中的表达

作者：张青; 张大为; 唐静; 高闻达; 刘全胜

来源：免疫学杂志, 2009, 25(5): 584-587.

• TNFR
• 融合蛋白
• 真核表达
• DG44细胞

目的 以pOptivec为载体,以DG44细胞为宿主细胞在贴壁培养条件下表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白.方法 将重组质粒hTNFR(p75)-IgG4-pOptivec线性化后转染DG44细胞,经筛选得到稳定表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白的DG44细胞克隆.培养上清经Protein G亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.然后对稳定表达目的 蛋白的细胞株进行不同浓度的MTX加压以扩增目的 基因,检测不同MTX加压条件下目的 蛋白的表达量.结果 重组质粒成功转染DG44细胞,经筛选后得到稳定表达目的 蛋白的细胞株.经MTX加压后最高表达量达到15 μg/mL培养基左右.结论 hTNFR(p75)-IgG4融合基因片段在DG44细胞中成功表达,且其表达量能够满足实验研究的需要,为下一步实验打下了良好的基础.

• 单位
  生命科学学院; 四川大学