黄芩苷通过上调lncRNA H19表达来减轻MPP+诱导的PC12细胞神经毒性

作者：唐蕾; 曾飞跃; 肖巨雄

来源：卒中与神经疾病, 2021, 28(04): 371-377.

• 黄芩苷
• lncRNA H19
• +" name="keyword">MPP+
• PC12细胞
• 存活
• 凋亡

目的探讨黄芩苷是否通过上调长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)H19表达来减轻1-甲基4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP+)诱导的PC12细胞神经毒性。方法分别采用0.5、0.75、1、2 mmol/L MPP+和10、20、50和70μmol/L黄芩苷作用PC12细胞,后续试验使用水平分别选择0.75 mmol/L MPP+和50μmol/L黄芩苷;以0.75 mmol/L MPP+损伤PC12细胞,体外模拟帕金森病,并加入黄芩苷;采用四甲基偶氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)进行细胞活力测定,Annexin V-异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate isomer, FITC)/碘化丙啶(Propidium iodide, PI)双染法进行凋亡定量分析,蛋白质印迹分析(Western blot)检测Pro-天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase)-3,Cleaved-caspase-3,B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的相对表达水平,实时定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR)进行lncRNA H19的相对表达水平检测;在PC12细胞中转染lncRNA H19小干扰RNA(lncRNA H19 siRNA,si-H19),并加入MPP+和黄芩苷,考察PC12细胞增殖、凋亡等变化。结果与对照组比较,MPP+降低PC12细胞的存活率、Bcl-2蛋白、lncRNA H19相对表达水平,提高PC12细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3,Bax蛋白相对表达水平(P<0.05),而Pro-caspase-3蛋白相对表达水平无明显变化(P>0.05)。与MPP+组比较,黄芩苷显著提高MPP+诱导的PC12细胞的存活率、Bcl-2蛋白、lncRNA H19相对表达水平,降低PC12细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3,Bax蛋白相对表达水平(P<0.05),而Pro-caspase-3蛋白相对表达水平无明显变化(P>0.05)。转染si-H19后黄芩苷和MPP+诱导的PC12细胞的存活率、Bcl-2蛋白相对表达水平降低,PC12细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3,Bax蛋白相对表达水平升高(P<0.05),而Pro-caspase-3蛋白相对表达水平无明显变化(P>0.05)。结论黄芩苷上调lncRNA H19表达,提高MPP+诱导的PC12细胞活力和降低其凋亡,减轻MPP+诱导的PC12细胞神经毒性。

• 单位
  中南大学湘雅医院; 神经内科; 长沙市第四医院