Let-7a靶向抑制Ewing肉瘤中CDK6的表达

作者：瞿岱彪; 邵斌; 袁志峰; 王芳; 余佳; 刘会文

来源：基础医学与临床, 2014, 34(11): 1524-1529.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2014.11.020

• Let-7a
• CDK6
• Ewing肉瘤

目的研究抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中的靶基因。方法用Northern blot分析细胞系中Let-7a的表达量;构建p MIR-reporter-CDK6野生型(CDK6WT)或突变型(CDK6MUT)及阳性对照(Let-7aPC)质粒;体外合成的寡核苷酸(Let-7amimic)转染Ewing肉瘤细胞系SK-ES-1,用real time PCR检测Let-7a的表达;通过生物信息软件分析、双荧光素酶报告实验和Western blot寻找并确定Let-7a的靶基因。结果 Let-7a在Ewing肉瘤细胞系中系低表达,以MSCs为参照,SK-ES-1 Let-7a/U6 snRNA灰度值最高为:0.193±0.024(P<0.05);双酶切和DNA测序鉴定质粒构建成功;在SK-ES-1细胞中成功过表达Let-7a(P<0.01);野生型CDK6(CDK6WT)荧光素酶表达水平与对照组和突变型CDK6(CDK6MUT)相比明显下降(P<0.05);在SK-ES-1细胞系中过表达Let-7a抑制了CDK-6 mRNA和蛋白质的表达。结论确定了抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中靶基因,为进一步实验奠定了基础。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 北京协和医学院; 中国医学科学院基础医学研究所; 景德镇市第一人民医院骨科