非洲马瘟病毒重组VP7蛋白在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备与鉴定

作者：王轩莹; 户鑫兵; 罗昭依; 田占成; 高闪电; 殷宏; 罗建勋; 关贵全; 苟惠天^*; 独军政^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(08): 971-976.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0127

• 非洲马瘟病毒
• VP7蛋白
• 多克隆抗体

非洲马瘟是由非洲马瘟病毒感染马引起的一种以发热、皮下和肺组织水肿及内脏出血为主要特征的烈性传染病。本研究首先通过PCR以合成的AHSV S7基因为模板扩增得到开放阅读框片段，将其克隆至大肠杆菌表达载体p PROEX HTb，成功构建重组质粒p PROEX-AHSVS7。转化重组质粒p PROEX-AHS-VS7到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达，通过SDS-PAGE和免疫印迹（Western-blot）对表达产物进行鉴定。采用包涵体和亲和层析纯化的方法对表达产物进行纯化，获得纯度较高的重组VP7蛋白，经3次免疫新西兰大白兔收集血清并进行抗体纯化，通过Western-blot、免疫荧光和间接ELISA法进行抗体的鉴定。结果表明，本试验利用大肠杆菌系统成功诱导表达了约为40 ku的重组AHSV VP7蛋白，并成功制备出特异的VP7多克隆抗体。以上结果为进一步研究VP7蛋白的生物学功能、建立诊断方法及亚单位疫苗研发提供了基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心