马铃薯野生种SpSBP1基因的克隆及CRISPR/Cas9载体构建

作者：陈娜; 邵勤; 李晓鹏; 高阳; 卢其能^*

来源：华北农学报, 2022, 37(06): 23-33.

• 马铃薯野生种
• 自交不亲和
• SpSBP1
• 克隆
• 生物信息学分析
• CRISPR/Cas9载体构建

为了探究SBP1基因在植物自交不亲和方面的重要作用，以二倍体马铃薯野生种为材料，利用RT-PCR技术克隆获得马铃薯野生种SpSBP1(登录号：MZ803088)的cDNA全长序列，并对其进行生物信息学分析及CRISPR/Cas9载体构建。结果显示，SpSBP1基因的cDNA全长为1 176 bp,包含92 bp的5′非编码区和163 bp的3′非编码区，其最大开放阅读框为921 bp,编码306个氨基酸。蛋白结构域分析显示，SpSBP1蛋白包括Smc超家族结构域以及RING finger和Zinc finger结构域。蛋白同源序列比对及系统进化树分析显示，马铃薯野生种SpSBP1与马铃薯野生种ScSBP1的同源性最高，其次为花烟草。生物信息学分析显示，SpSBP1分子质量为34.731 44 ku,理论等电点pI为5.10,推测得出该蛋白为酸性不稳定亲水性蛋白。二级结构预测该蛋白主要由α螺旋和无规则卷曲所构成。同时该蛋白属于非分泌蛋白且不存在跨膜结构。从二倍体马铃薯野生种中克隆出了SpBP1基因，同时成功构建了CRISPR/Cas9载体，并进行了遗传转化试验。

• 单位
  宜春学院; 生命科学与资源环境学院