池蝶蚌IκBα和c-Rel的结构特征及在LPS刺激下的表达分析

作者：王小敏; 周叶; 马慧妹; ZAHID Anwar; 胡蓓娟; 彭扣; 洪一江^*

来源：水生生物学报, 2023, 47(05): 786-795.

• HsIκBα
• Hsc-Rel
• 克隆
• 蛋白互作
• LPS刺激
• 池蝶蚌

为研究淡水贝类NF-κB/Rel信号通路中核因子κB(Nuclear factor-κappaB, NF-κB)和NF-κB抑制因子(Inhibitors of NF-κB, IκB)的功能,对池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)IκBα和c-Rel(以下简称HsIκBα和Hsc-Rel)的序列结构、表达特征及Hs IκBα和Hsc-Rel之间的相互关系进行了分析。结果表明, Hs IκBα的c DNA全长为1783 bp,其开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)为1083 bp,编码360个氨基酸。Hsc-Rel的cDNA为2414 bp, ORF为2298 bp,编码765个氨基酸。通过构建HsIκBα-ORF-GST和Hsc-Rel-RHD-HIS重组质粒、原核诱导表达和纯化,进行GST-pull down,通过SDS-PAGE和Western Blot检测研究,发现HsIκBα和Hsc-Rel-RHD存在直接的相互作用。通过对池蝶蚌进行脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)刺激后,分别在7个时间点(0、6h、12h、24h、36h、48h和72h)对10个组织中HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA表达差异性进行分析,结果显示:HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA在所有组织都有表达,且在肝胰腺组织表达最高,在血细胞表达最低。在6h时, HsIκBα在8个组织中和Hsc-Rel在7个组织中的表达水平都出现下调;在12h时, HsIκBα在10个组织中的表达量都上调,并且都达到了峰值。Hsc-Rel只有血细胞、心脏、肝胰腺和肠出现上调;在24h时, HsIκBα在10个组织中的表达值呈现下调,Hsc-Rel却都出现上调(肾组织除外),其中血细胞、斧足、肠的表达值达到峰值;在36—72h, HsIκBα和HscRel的部分组织的表达值逐渐恢复到基础水平,以上结果表明, HsIκBα和Hsc-Rel的表达量随着LPS的诱导而产生明显变化,说明其参与免疫应答反应,且可能存在应答LPS的NF-κB通路。

• 单位
  南昌大学; 生命科学学院