蛋白激酶A抑制剂H-89通过Wee1B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育

作者：张苧兮; 刘超; 任丽莉; 刘乙蒙; 齐川; 于秉治; 肖建英

来源：解剖学杂志, 2016, 39(02): 137-141.

• Wee1B
• 蛋白激酶A
• 有丝分裂促进因子
• H-89
• 受精卵
• 小鼠

目的:探讨蛋白激酶A(PKA)抑制剂H 89通过调控小鼠蛋白激酶Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵,经H-89预处理后显微注射Wee1B-mRNAs,相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定M期促进因子(MPF)活性;免疫印迹检测Wee1B蛋白表达、CDC2pTyr15和Wee1B-pSer15磷酸化及Wee1B-pSer15非磷酸化状态。结果:H-89持续存在时,在受精卵G1和S期检测到Wee1B-Ser15的磷酸化条带,在G2期和M期检测到Wee1B-Ser15的非磷酸化条带;小鼠受精卵有丝分裂进程加快,但过表达Wee1B-WT和过表达突变体Wee1B-S15A/D均能延缓受精卵有丝分裂进程,逆转由H-89引起的促进分裂作用。结论:H-89抑制PKA活性,从而抑制Wee1B蛋白S15位点的磷酸化状态,但过表达Wee1B-S15A/D有效逆转H-89加速的G2/M期转换,使受精卵的分裂延迟。提示Wee1B蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点。

• 单位
  中国医科大学; 锦州医科大学