摘要
研究利用HPLC-MS/MS检测、酪氨酸酶活性分析和荧光定量PCR技术,探索丙戊酸(Valproic acid, VPA)作为企鹅珍珠贝[Pteria penguin (R?ding, 1798)]黑色素增强剂的生物毒性、有效性和作用途径。生物毒性分析显示,高浓度(100 mmol/L)丙戊酸作用24h即可显著降低存活率至83.3%(P<0.05),并存在明显的时间依赖效应, 10 mmol/L丙戊酸作用72h是最大的安全使用浓度和作用时间。丙戊酸的作用分析发现, 10和100 mmol/L丙戊酸作用72h可以显著提高企鹅珍珠贝黑色素含量43.7%(P<0.05)和47.1%(P<0.05),并显著提高酪氨酸酶(黑色素合成标志酶)活性59.7%(P<0.05)和136.1%(P<0.01),说明丙戊酸可以有效地促进企鹅珍珠贝的黑色素合成。对丙戊酸的作用途径分析发现,丙戊酸可以显著增加小眼相关转录因子(Melanogenesis associated transcription factor, Mitf)、酪氨酸酶(Tyrosinase, Tyr)、Cdk2 (Cyclin-dependent kinase 2)和Bcl2 (B-cell lymp homa2)等黑色素合成相关基因的表达,但对环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein, Creb2)的表达无显著影响,说明丙戊酸是通过Mitf-Tyr-melanin途径参与企鹅珍珠贝黑色素合成的。研究为在生产上建立珍珠贝的色泽优化技术提供了重要数据。
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