靶向RelA(p65)基因shRNA慢病毒载体构建及功能鉴定

作者：霍云飞; 高**; 豆双双; 寇卜心; 柴梦音; 刘晓霓; 石英^*

来源：中国临床新医学, 2023, 16(09): 907-912.

• RelA基因
• 短发夹RNA
• 慢病毒
• 肝癌

目的 构建靶向RelA(p65)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体，并对其功能进行验证。方法 设计3对针对RelA基因的RNA干扰序列，并合成相应的shRNA序列。shRNA退火形成双链oligo序列后应用基因重组技术构建重组质粒，经菌落聚合酶链式反应(PCR)及测序鉴定，将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定，通过Western blot实验筛选出对HepG2细胞株中RelA基因干扰效果最好的慢病毒，并通过CCK-8检测Lenti-shRelA对细胞增殖活性的影响。结果 测序结果显示重组慢病毒载体与设计参考序列一致，提示重组慢病毒载体构建成功。重组慢病毒Y4056、Y21318、Y21319、Y21320的滴度分别为3.13×108 TU/ml、2.97×108 TU/ml、2.51×108 TU/ml、3.40×108 TU/ml。用慢病毒Lenti-shRelA(Y21318、Y21319、Y21320、Y4056)感染HepG2细胞，Western blot实验结果显示Y21320对HepG2细胞株中RelA基因的干扰效果最好。CCK-8实验结果显示RelA的敲降可显著抑制细胞增殖活力。结论 该研究成功构建了靶向RelA基因shRNA慢病毒载体，其能有效下调HepG2细胞RelA的表达并抑制细胞增殖，为进一步研究RelA在肝癌发生、发展中的机制奠定了基础。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院