三结构域蛋白37通过调控转化生长因子-β-Smad2/3促进胆管癌细胞增殖、侵袭与迁移

作者：张世航; 江建新^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(07).

• 三结构域蛋白37
• 胆管癌
• 增殖
• 侵袭
• 迁移

目的探讨三结构域蛋白37(TRIM37)对胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其作用机制。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析TRIM37在胆管癌组织和癌旁组织的表达情况及其与临床病理特征、预后的相关性。通过实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测胆管癌细胞中TRIM37的表达情况。转染小干扰RNA(siRNA)以沉默TRIM37基因的表达;转染慢病毒以上调TRIM37基因的表达。采用平板克隆实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Edu-555细胞增殖检测盒实验、Transwell实验、划痕愈合实验等检测TRIM37对胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测通路关键指标的表达量。两组间数据比较采用t检验, 组内两两比较采用LSD-t检验, 多组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果 RT-qPCR结果显示人胆管癌细胞HuCCT1(2.29±0.03)、RBE(1.67±0.05)、TFK-1(3.10±0.12)、HCCC-9810(2.61±0.06)中TRIM37 mRNA的表达水平高于人肝内胆管上皮细胞(1.02±0.04, t=45.420、18.200、29.820、41.520, P<0.05), 差异有统计学意义。沉默TRIM37的表达后可抑制胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移能力。Western blot结果显示, 沉默TRIM37后的实验组TFK-1和HuCCT1细胞中p-Smad2/3、Smad2/3、Snail1、Vimentin的表达量均低于阴性对照组(0.65±0.11比1.00±0.13、0.70±0.11比1.00±0.16、0.60±0.15比1.00±0.16、0.76±0.04比1.00±0.06, 0.66±0.11比1.00±0.06、0.67±0.05比1.00±0.10、0.57±0.64比1.00±0.05、0.67±0.14比1.00±0.03, t=4.372、3.546、3.175、5.823, t=4.902、5.021、5.708、3.847, P<0.05);上调TRIM37的表达后则高于其对照组(1.30±0.16比1.00±0.07、1.89±0.06比1.00±0.04、1.22±0.10比1.00±0.07、1.84±0.06比1.00±0.11, 1.47±0.1比1.00±0.02、1.33±0.01比1.00±0.09、1.39±0.06比1.00±0.09、1.58±0.08比1.00±0.03, t=2.938、3.198、3.034、11.304、7.254、6.696、6.053、11.103, P<0.05), 差异有统计学意义。回复实验中加用TGF-β-Smad2/3通路抑制剂SB431542(10 μmol/L)可逆转胆管癌恶性表型, 上调TRIM37后TGF-β-Smad2/3通路激活增加, 同时加用SB431542(10 μmol/L)此通路被抑制。结论 TRIM37在胆管癌中高表达, 可通过调控TGF-β-Smad2/3促进胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移。

• 单位
  武汉大学人民医院