靶向survivin的siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定

作者：王小林; 侯建全; 何军; 杨慎敏; 温端改

来源：临床检验杂志, 2007, 25(1): 28-31.

DOI：10.3969/j.issn.1001-764X.2007.01.011

• survivin基因
• 小干扰RNA
• 遗传载体

目的 构建靶向survivin的siRNA表达载体.方法 设计合成靶向survivin的siRNA相应DNA模板单链,将其克隆入空质粒pRNAT-U6.1/Neo,模板链两端分别设计两个不同的酶切位点,退火形成siRNA载体插入片段.用限制性酶切将空载体线性化,T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中,对该重组表达载体进行鉴定,获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin.脂质体法将pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入膀胱癌T24细胞株,实时定量PCR法检测对T24细胞survivin基因表达的抑制情况.结果 PCR、酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变.重组载体能干扰T24细胞survivin基因的表达,并具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株.结论 成功构建了靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin,并转染膀胱癌细胞株,为进一步运用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础.

• 单位
  苏州大学附属第一医院