基于MeCP2蛋白和双酶信号放大的DNA甲基化电化学免疫分析

作者：粟莎莎; 张姝; 黄健; 陈曦; 李艳; 方立超; 邓钧; 莫非^*; 郑峻松^*

来源：贵州医科大学学报, 2019, 44(09): 1005-1015.

DOI：10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.09.003

• DNA甲基化
• 电化学
• 生物传感技术
• 甲基化CpG结合蛋白2
• 双酶催化
• 免疫分析

目的:探讨甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)和双酶信号放大电化学免疫传感器用于DNA甲基化定量检测的效果。方法:固定在纳米金(AuNPs)修饰电极表面的探针与靶DNA杂交后,将电极于37℃下与MeCP2蛋白溶液孵育,再与葡萄糖氧化酶(GOD)和辣根过氧化物酶(HRP)共同标记的MeCP2-His标签抗体(GOD-HRP/anti-His tag)反应;于含葡萄糖和对苯二酚的检测液中测试其电化学信号,建立电信号大小与DNA甲基化浓度之间的关系,确定该传感器的检测限,考察实验所设计的双酶信号放大策略的放大效果。结果:在1.0×10-14～1.0×10-7 mol/L范围内,电信号大小与DNA甲基化浓度的对数呈线性关系,回归方程为I(峰电流值,μA)=1.038 lg C(DNA甲基化的浓度,mol/L)+16.598,相关系数r为0.993,检出限为0.1 fmol/L;双酶标记体系的DPV峰电流最高(9.105μA),单独HRP标记体系的DPV峰电流为1.99μA,单独GOD标记体系的电信号极其微弱、仅为0.969μA;重复性实验得RSD为4.6%;将传感器置于pH 7.4的PBS中,4℃条件下放置28 d后,响应电流大小为最初的93.7%,表明该传感器具有较好的稳定性;与单酶标记体系相比,双酶标记体系产生的电化学信号更强。结论:采用基于MeCP2和双酶信号放大电化学免疫传感器具有较高的灵敏度,能实现痕量DNA甲基化的检测。

• 单位
  贵州医科大学; 中国人民解放军陆军军医大学