建立β3肾上腺素能受体过表达的心肌成纤维细胞模型方法的比较

作者：张源; 王丽; 张慧; 马依彤; 杨毅宁; 马苗苗; 朱晓丽

来源：中国全科医学, 2016, 19(15): 1774-1780.

• 受体,肾上腺素能β3
• 成纤维细胞
• 心肌
• 慢病毒载体

目的用两种不同的方法构建β3肾上腺素能受体(β3-AR)过表达的SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFBs)模型,并对两种方法的效果进行比较,为今后在细胞水平观察β3-AR对心功能,尤其是对慢性心力衰竭(CHF)的影响提供新的实验方法。方法 2015年3—6月,选取出生13 d的SFP级SD乳鼠8只。分离SD乳鼠CFBs并体外培养,随机分为3个感染复数(MOI)组,分别为MOI 50组、MOI 100组、MOI 200组,采用β3-AR基因过表达的慢病毒载体感染CFBs,利用流式细胞仪检测感染率,确定最佳MOI。将SD乳鼠CFBs随机分为4个β3-AR激动剂干预组,分别为正常对照组、10-6mol/L组、10-5mol/L组、10-4mol/L组,采用不同浓度β3-AR激动剂干预CFBs,利用Western blotting法检测β3-AR表达水平,挑选出β3-AR激动剂干预CFBs的最适浓度。结果普通光学显微镜下观察CFBs,无搏动性,大多数呈梭形,其细胞核较大,胞质透明。倒置荧光显微镜下观察感染24、48、72、96h时CFBs状态及荧光表达情况,感染72 h时,各MOI组CFBs生长状态较好,细胞大多数呈梭形,无搏动性,细胞核较大,且肉眼观察荧光表达最佳。MOI 100组、MOI 200组感染率高于MOI 50组(P<0.05);MOI 200组感染率低于MOI 100组(P<0.05)。10-6mol/L组、10-5mol/L组、10-4mol/L组β3-AR表达水平高于正常对照组(P<0.05);10-5mol/L组β3-AR表达水平高于10-6mol/L组、10-4mol/L组(P<0.05)。10-5mol/L组、MOI 100组β3-AR表达水平高于正常对照组(P<0.05);MOI 100组β3-AR表达水平高于10-5mol/L组(P<0.05)。结论使用β3-AR过表达的慢病毒载体感染CFBs与β3-AR激动剂干预CFBs均可使其β3-AR过表达,且前者效果优于后者。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 石河子大学医学院第一附属医院