鲤疱疹病毒Ⅱ型套式PCR检测方法的建立

作者：安伟; 张明辉^*; 彭军辉

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (12): 127-131.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.02.0174

• 鲫造血器官坏死病
• 鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)
• 鲫鱼
• 检测方法
• 套式PCR

为了快速准确检测引发鲫造血器官坏死病的鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2),试验根据GenBank中发表的CyHV-2解旋酶基因序列设计2对特异性引物,对PCR退火温度进行优化,建立了CyHV-2套式PCR检测方法,对引物的特异性和敏感性进行检验,并利用该方法对138份鲫鱼临床样品进行了检测。结果表明:试验建立的套式PCR检测方法第1轮和第2轮的最佳退火温度分别为55℃和59℃;该方法能特异性地扩增出515 bp和277 bp的CyHV-2解旋酶基因片段,且对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、对虾白斑病毒(WSSV)、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)和虾虹彩病毒(SHIV)均不能扩增出任何片段;对CyHV-2的检测灵敏度为常规PCR方法的100～1 000倍;临床样品检测结果显示符合率为100%。说明建立的套式PCR方法具有极高的特异性和灵敏性,可用于CyHV-2急性感染和隐性感染的早期诊断。

• 单位
  上海市水产研究所