PKR基因表达高效阻断Marc-145细胞系建立及其对PRRSV增殖的影响

作者：肖跃强; 杨慧; 于雪; 王文秀; 孙培姣; 魏凤; 唐娜; 沈志强

来源：中国兽医学报, 2022, 42(08): 1535-1540.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.08.03

• Marc-145细胞
• PKR下调表达
• shRNA
• PRRSV

研究猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)在Marc-145细胞蛋白激酶R(interferon-induced, double-stranded RNA-activated kinase, PKR)下调表达状态下的感染特性。以Macr-145细胞PKR基因序列设计3个shRNA,并设阳性对照，合成后插入pSilencerTM 2.1-U6载体构建重组质粒，与Macr-145细胞PKR+EGFP标签融合表达的重组质粒共转染HEK293细胞，以筛选能下调表达PKR的shRNA,并将该shRNA重组质粒转染Marc-145细胞，潮霉素B抗性筛选并克隆纯化获得PKR下调表达的细胞系，感染重组病毒PRRSV XZ06a-EGFP,通过检测病毒结构蛋白M与EGFP表达、观察细胞病变等，研究此状态下感染特性。结果显示筛选获得致使PKR下调表达的shRNA,以及稳定表达shRNA、PKR表达降低90%以上的Marc-145细胞系，重组病毒感染后48 h, M蛋白与EGFP表达均受到抑制，且与对照相比，感染后72～96 h,未观察到典型的细胞病变效应，说明在PKR表达受到抑制时，病毒增殖受到明显抑制。本研究通过建立PKR下调表达细胞系与PRRSV感染试验，初步阐明PKR在PRRSV增殖时所发挥的作用，为进一步开展PRRSV与细胞抗病毒固有免疫互作机制研究奠定了基础。

• 单位
  山东省滨州畜牧兽医研究院