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摘要
目的探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对Eca-109食管癌细胞生物学行为的影响。方法分别给予0.01、0.05、1.00 μmol/L剂量的PHC处理人Eca-109食管癌细胞, 采用细胞计数试剂8(CCK-8)法、平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及细胞凋亡率;使用划痕实验和Transwell迁移分析实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测长基因间非蛋白编码RNA 00982(LINC00982)表达量。pcDNA、pcDNA-LINC00982分别转染至Eca-109细胞, si-NC、si-LINC00982分别转染至Eca-109细胞后分别加入0.01、0.05、1.00 μmol/L PHC处理24 h, 采用上述方法分别检测细胞增殖、克隆形成数目、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏素、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和N-钙黏素蛋白表达量。采用独立样本t检验和单因素方差分析。结果 PHC低、中和高剂量组Eca-109细胞增殖抑制率[(12.37±0.86)%、(24.88±1.68)%、(42.35±1.76)%比(0.00±0.00)%, F=1769.000, P<0.05]、细胞凋亡率[(11.82±0.57)%、(17.27±0.75)%、(23.16±1.22)%比(7.71±0.41)%, F=636.800, P<0.05]、bax蛋白表达(0.34±0.06、0.46±0.07、0.63±0.09比0.19±0.04, F=68.640, P<0.05)和E-钙粘素蛋白水平(0.20±0.04、0.32±0.05、0.53±0.07比0.11±0.03, F=120.000, P<0.05)高于对照组。PHC低、中和高剂量组LINC00982表达量(1.62±0.08、2.24±0.09、3.43±0.13比1.00±0.00, F=1233.000, P<0.05)高于对照组, 细胞克隆形成数目[(86.96±3.52)、(64.52±2.45)、(43.52±2.34)个比(112.87±6.59), F=474.800, P<0.05]、迁移[(190.88±7.76)、(155.71±5.83)、(116.32±3.58)个比(217.55±6.89)个, F=449.200, P<0.05]及侵袭能力[(127.62±3.65)、(95.83±4.32)、(73.32±2.51)个比(157.51±6.21)个, F=634.400, P<0.05]低于对照组, 划痕愈合率[(50.73±1.29)%、(38.60±1.78)%、(29.93±1.13)比(63.76±2.48)%, F=636.800, P<0.05]、bcl-2蛋白表达量(0.56±0.08、0.37±0.05、(0.21±0.04比0.72±0.03, F=155.900, P<0.05)和N钙粘素蛋白水平(0.56±0.07、0.44±0.06、0.20±0.03比0.73±0.05, F=150.100, P<0.05)低于对照组, 且呈剂量依赖性。pcDNA-LINC00982组细胞增殖抑制率[(34.53±1.09)%比(0.00±0.00)%, t=95.040, P<0.05]、细胞凋亡率[(21.14±0.87)%比(7.59±0.43)%, t=41.890, P<0.05]、bax蛋白表达(0.52±0.06比0.17±0.03, t=15.560, P<0.05)和E-钙粘素蛋白水平(0.44±0.05比0.15±0.03, t=14.920, P<0.05)高于pcDNA组, 细胞克隆形成数目[(57.58±2.83)个比(110.56±7.27)个, t=20.370, P<0.05]、迁移[(135.67±6.72)个比(220.81±5.73)个, t=28.920, P<0.05]及侵袭能力[(88.52±3.76)个比(161.72±5.27)个, t=33.920, P<0.05]低于pcDNA组, 划痕愈合率[(34.63±2.75)%比(63.87±3.89)%, t=18.140, P<0.05]、bcl-2蛋白表达(0.27±0.04比0.73±0.07, t=17.120, P<0.05)和N-钙粘素蛋白水平(0.24±0.05比0.71±0.08, t=14.950, P<0.05)低于pcDNA组, 而转染si-LINC00982可减弱PHC对Eca-109细胞生物学行为的作用。结论 PHC可通过上调LINC00982的表达而减弱食管癌Eca-109细胞的增殖、克隆、迁移及侵袭能力, 促进细胞凋亡。
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