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摘要
目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398联合光动力疗法(PDT)对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及其作用机制。方法将QBC939进行体外培养, 人胆管癌QBC939细胞来源于上海中科院细胞库, 采用随机化分组法进行分组, 培养72 h后进行细胞计数盒-8(CCK-8)实验。实验分为4组, 即单纯NS-398组、单纯PDT组、联合实验组和空白对照组, 分别将0、25、50、100、200 μmol/L浓度的NS-398和0、2、4、6、8、10 mg/L浓度的血卟啉衍生物(HPD)在0、5、10、15 J/cm2的光照强度作用下, 分别依次联合作用于QBC939细胞;运用CCK-8法检测各组的细胞生长抑制率(R);采用流式细胞法检测QBC939细胞的凋亡率(A);应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测QBC939细胞中COX-2和血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的基因表达情况;采用免疫细胞化学链霉亲和素-过氧化物酶结合物(SP)法测定QBC939细胞质中COX-2和VEGF-C的蛋白表达情况;应用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定QBC939细胞上清中COX-2和VEGF-C的蛋白分泌情况, 组间比较进行单因素方差分析。结果 NS-398和PDT两种措施在体外均能单独抑制QBC939细胞生长, 当NS-398浓度为50 μmol/L, HPD浓度为8 mg/L、光照强度为5 J/cm2联合作用后, R可达95%, 联合实验组与单纯NS-398组、单纯PDT组和空白对照组比较差异均有统计学意义, 继续上调两者的强度, R变化不明显;流式细胞实验中联合实验组A为(55.19±1.14)%, 与空白对照组(5.57±1.21)%、单纯NS-398组(19.55±1.06)%和单纯PDT组(18.62±1.18)%比较差异均有统计学意义(F=6 153.000, P<0.05);荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)结果可见COX-2在联合实验组(0.21±0.02)中表达量明显低于空白对照组(1.00±0.00)、单纯NS-398组(0.32±0.03)和单纯PDT组(0.35±0.02), 差异均有统计学意义(F=8 446.182, P<0.05), VEGF-C在联合实验组(0.23±0.01)中表达量明显低于空白对照组(1.00±0.00)、单纯NS-398组(0.36±0.02)和单纯PDT组(0.38±0.03), 差异均有统计学意义(F=8 571.895, P<0.05);SP免疫细胞化学结果表明COX-2在联合实验组[(4.96±0.42)%中]表达量明显低于空白对照组[(55.12±0.87)%]、单纯NS-398组[(21.26±0.49)%]和单纯PDT组[(25.83±0.45)%], 差异均有统计学意义(F=28 134.564, P<0.05), VEGF-C在联合实验组[(20.65±1.02)%]中表达量明显低于空白对照组[(67.51±1.48)%]、单纯NS-398组[(30.54±1.31)%]和单纯PDT组[(32.12±1.25)%], 差异均有统计学意义(F=3 739.623, P<0.05);ELISA可见COX-2在联合实验组[(26.58±0.27) μg/L]中表达量明显低于空白对照组[(35.14±0.22) μg/L]、单纯NS-398组[(30.29±0.31) μg/L]和单纯PDT组[(31.67±0.13) μg/L], 差异均有统计学意义(F=2 972.978, P<0.05), VEGF-C在联合实验组[(1.36±0.02) μg/L]中表达量明显低于空白对照组[(1.69±0.03) μg/L]、单纯NS-398组[(1.45±0.03) μg/L]和单纯PDT组[(1.47±0.04) μg/L], 差异均有统计学意义(F=420.490, P<0.05)。结论 NS-398和PDT两种措施联合可显著抑制QBC939细胞生长, 促进细胞早期凋亡, 其对QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过抑制COX-2和VEGF-C的表达, 进而促进细胞早期凋亡实现的。
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