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摘要
目的 miR-335在胃癌中的抑癌作用及表达下调的机制尚不明确,为此本研究探讨miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌miR-335表达水平、临床病理特征以及预后的影响。方法收集2009-07-01-2011-07-01中国医科大学附属第四医院就诊经病理诊断为原发性胃癌,并行根治性手术的231例新鲜胃癌组织及配对癌旁组织(距离癌组织>5cm);1株永生化的胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和4株胃癌细胞系(SGC-7901、MKN-45、BGC-823和AGS)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌细胞株及231例胃癌组织中miR-335的表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)和甲基化测序(BSP)方法检测胃癌细胞系及胃癌组织中miR-335的基因启动子区甲基化状态。综合分析miR-335表达水平,miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌患者临床病理特征及预后的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-335在MKN-45细胞株表达水平为GES-1细胞株的0.154±0.016倍(P<0.01),在SGC-7901细胞株表达水平为GES-1细胞株的0.138±0.013倍(P<0.01),在BGC-823细胞株表达水平为GES-1细胞株的0.432±0.076倍(P<0.01),在AGS细胞株表达水平为GES-1细胞株的0.749±0.072倍(P=0.01),均显著低于正常人胃黏膜永生化细胞株GES-1。miR-335在231例胃癌组织中的表达水平较癌旁相对正常组织明显下降,P<0.001。甲基化测序及MSP的实验结果表明,MKN-45、SGC-7901和BGC-823细胞株均存在基因启动子区异常高甲基化状态,AGS细胞株亦呈部分高甲基化状态。miR-335低表达与肿瘤大小(P=0.030)、血管浸润(P=0.027)、腹膜播散(P=0.027)、淋巴结转移(P=0.033)、不良pT分期(P=0.040)、不良pN分期(P=0.038)、不良TNM分期(P=0.005)和淋巴管浸润(P=0.041)显著相关。miR-335基因启动子区的高甲基化状态与肿瘤大小(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.046)、淋巴管浸润(P=0.001)和miR-335低表达(P<0.001)显著相关。Kaplan-Meier生存分析表明,高miR-335表达水平以及miR-335基因启动子区低甲基化状态的胃癌患者无病生存率显著升高。应用去甲基药物5-aza-2′-deoxycytidine处理胃癌细胞可以使miR-335的表达水平显著升高。结论胃癌细胞及组织中miR-335的表达下调及抑癌作用与miR-335基因启动子区异常高甲基化状态显著相关。低miR-335表达水平和miR-335基因启动子区异常高甲基化状态与胃癌患者的不良临床病理特征以及预后显著相关。
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单位中国医科大学附属第四医院
