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摘要
背景视网膜视黄酸在离焦性近视形成中起重要作用,但目前尚不清楚其如何通过视网膜色素上皮(RPE)屏障向脉络膜传递近视信号。目的研究全反式视黄酸(atRA)对离焦性近视眼RPE屏障功能的影响。方法 21日龄清洁级三色豚鼠30只,用随机数字表法分为正常对照组和离焦组,-6D凹透镜缝合于离焦组豚鼠左眼15 d以制备离焦性近视模型,每天光照与黑暗周期为12h/12h。用角膜曲率计测量各组豚鼠的角膜曲率半径,行复方托吡卡胺滴眼液扩瞳检影验光以测量豚鼠眼球屈光度,应用A型超声法测量各组豚鼠的眼轴长度。于造模15d时处死动物并分离视网膜,体外培养RPE细胞并传代,将第3代RPE细胞用于实验,制备视网膜铺片,接种于Millcell-PET微孔滤膜插入式培养池,分别加入1×10~(-6)、1×10~(-7)、1×10~(-8)和1×10~(-9)mol/L atRA培养RPE细胞24h,以加入等体积atRA溶剂的培养孔作为阴性对照,以完全培养基加MTT溶液的无细胞孔作为空白对照。采用MTT比色法检测各组RPE细胞的存活率,用CN10-EVOM2型电阻测量仪测定单层细胞跨上皮电阻(TER),计算RPE细胞的TER值,采用FM1-43型荧光染色技术检测得出RPE细胞FM1-43阳性荧光染色的相对强度值,评价RPE细胞膜泡运输变化。结果豚鼠模型眼屈光度为(-2.20±0.95)D,对照组为(+1.15±0.30)D,差异有统计学意义(t=14.57,P<0.01);豚鼠模型眼的眼轴长度为(8.24±0.09)mm,明显长于对照组的(7.81±0.05)mm,差异有统计学意义(t=17.20,P<0.01)。原代培养豚鼠近视眼的RPE细胞,取第3代细胞用于实验。RPE细胞接种于Millcell培养池1周后细胞长满滤膜,呈单层生长。加入atRA干预24 h,RPE细胞的存活率随药物浓度的升高而逐渐降低,1×10~(-9)mol/L atRA组RPE细胞存活率为93.3%,1×10~(-8)mol/L atRA组为88.2%,1×10~(-6)mol/L atRA组和1×10~(-7)mol/L atRA组的RPE细胞大量死亡。不同浓度atRA组RPE细胞的TER值和RPE细胞FM1-43阳性荧光染色的相对强度值的总体比较差异均有统计学意义(F=43.89,P=0.00;F=26.13,P=0.00),其中1×10~(-8)mol/L atRA...
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