脂毒性应激对Bcl-2蛋白诱导胰岛β细胞凋亡的调节作用

作者：钟丽红; 丘创华^*; 彭紫元; 佘吉佳

来源：检验医学, 2022, 37(03): 274-280.

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2022.03.017

• B淋巴细胞瘤-2蛋白
• β细胞
• 细胞凋亡
• 脂毒性应激
• 泛素化蛋白

目的 探讨脂毒性应激对B淋巴细胞瘤（Bcl）-2蛋白诱导胰岛β细胞凋亡的调节作用。方法 利用C57BL/6小鼠构建PUMA-/-小鼠，喂食高脂肪饮食72 h后处死并分离胰岛。分别用棕榈酸酯、蛋白酶体抑制剂MG132处理小鼠胰岛瘤MIN6细胞0、2、4、8、24 h，分别用萝卜硫烷（SFN）、棕榈酸酯、SFN+棕榈酸酯处理小鼠胰岛β细胞0、2、4、8、24 h。以用二甲基亚砜处理相同时间的MIN6细胞和β细胞作为对照。检测细胞蛋白酶体活性，活化转录因子4(ATF4)mRNA、重链结合蛋白（Bip）mRNA、C/EBP同源蛋白（Chop）mRNA、p53上调凋亡调控因子（PUMA） mRNA表达量，Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1和Akt蛋白表达量，同时评估细胞活性。结果 与0 h比较，采用棕榈酸酯处理MIN6细胞不同时间的蛋白酶体活性均无明显变化（P>0.05）；采用MG132处理MIN6细胞8 h的蛋白酶体活性显著降低（P<0.05）;MG132处理MIN6细胞24 h的Ub水平显著升高（P<0.05）。棕榈酸酯组和MG132组处理24 h后，MIN6细胞凋亡数显著高于对照组（P<0.05），棕榈酸酯和MG132处理24 h后，MIN6细胞ATF4 mRNA、Bip mRNA、Chop mRNA、PUMA mRNA表达量高于0 h(P<0.05)。棕榈酸酯和MG132处理24 h后，MIN6细胞Bcl-2、Bcl-XL、Akt蛋白水平显著低于0 h(P<0.05);Mcl-1蛋白水平呈先升后降趋势，棕榈酸处理2 h时Mcl-1蛋白水平最高，MG132处理8 h时Mcl-1水平最高。棕榈酸酯组β细胞凋亡率均显著高于SFN组、SFN+棕榈酸酯组和对照组（P<0.05）,SFN组、SFN+棕榈酸酯组及对照组之间β细胞凋亡率差异均无统计学意义（P>0.05）。棕榈酸酯组AFT4蛋白、Chop蛋白、Bip蛋白和PUMAmRNA水平均显著高于对照组（P<0.05）；而SFN+棕榈酸酯组与对照组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 靶向泛素-蛋白酶体系统（UPS）和Bcl-2蛋白表达能有效预防胰岛β细胞凋亡。

• 单位
  深圳市第二人民医院