内质网应激在PM2.5诱导大鼠肺泡巨噬细胞凋亡中的作用

作者：王婷婷; 杜毓锋; 刘学军

来源：国际呼吸杂志, 2017, 37(05): 354-360.

• PM2.5
• 肺泡巨噬细胞
• 凋亡
• 内质网应激

目的本研究通过用PM2.5干预传代培养的大鼠肺泡巨噬细胞,检测细胞存活率、凋亡率,及内质网应激信号分子C/EBP同源蛋白(C/EBP honologus protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(glucoser regulated ptotein 78,GRP78)的mRNA相对表达量,探讨内质网应激在PM2.5诱导肺泡巨噬细胞凋亡过程中的作用。方法用不同浓度的PM2.5干预传代培养的肺泡巨噬细胞(NR8383细胞),分6个浓度组(分别为H0:0 mg/L,空白对照组,加等体积的PBS液;H1:40 mg/L;H2:80 mg/L;H3:160 mg/L;H4:320 mg/L;H5:640 mg/L),经12 h、24 h、48 h 3个时间后,用MTT法检测NR8383细胞的存活率,选择最佳的干预时间。将传代的NR8383细胞接种于6孔板,浓度组设置同MTT,每组设3个复孔(n=3),经最佳干预时间后,采用流式细胞术检测各浓度组细胞的早期凋亡率及总凋亡率,用RT-PCR法检测各浓度组CHOP mRNA、GRP78 mRNA的相对表达量。结果 PM2.5干预12 h后,H1组与H0组、H2组与H1组细胞存活率间的差异无统计学意义(P>0.05),余组间差异有统计学意义(P<0.05),且随干预浓度的增加,细胞存活率下降。干预24 h后,除H5组与H4组差异无统计学意义(P>0.05),余各组细胞存活率的组间差异有统计学意义(P<0.05)。干预48 h后,H4组与H3组及H5组与H4组差异无统计学意义(P>0.05),余各组细胞存活率的组间差异有统计学意义(P<0.05)。各浓度组在PM2.5环境中分别暴露12 h、24 h、48 h后,以暴露24 h后各浓度组间差异较12 h、48 h明显,确定24 h为最佳的干预时间。经不同浓度的PM2.5干预24 h后,H1组较H0组、H5组较H4组的细胞早期凋亡率无明显增加,差异无统计学意义(P>0.05),余各组与H0组比较,细胞早期凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。干预24 h后,各浓度组的细胞总凋亡率较H0组均增加明显,且随干预浓度的增加,细胞凋亡率相应增加,组间差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度PM2.5干预24 h后,H1组较H0组、H4组较H3组的GRP78 mRNA的相对表达量无明显增加,差异无统计学意义(P>0.05),余各组与H0组比较,GRP78 mRNA的相对表达量均增加,组间差异有统计学意义(P<0.05)。干预24 h后,各浓度组的细胞CHOP mRNA的相对表达量较H0组增加明显,随干预浓度的增加,其相对表达量相应增加,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PM2.5诱导NR8383细胞凋亡,内质网应激参与PM2.5诱导NR8383细胞凋亡的过程。

• 单位
  山西医科大学第一医院