微小RNA-23a-3p负调控Runx2基因抑制骨髓间充质干细胞成骨分化诱导绝经后骨质疏松的研究

作者：纪元元; 李劲峰; 寇红伟; 陈松峰; 苏会芳; 冷子宽; 尚春风; 朱迪; 姬彦辉; 王义生; 刘宏建

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(01): 112-115.

• 微小RNA
• 骨髓间充质干细胞
• 绝经后骨质疏松症
• 成骨分化

目的观察微小RNA(miR)-23a-3p通过调控Runx2基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法绝经后骨质疏松症(PMOP)患者及正常的女性志愿者各30例, 检测两组血清中miR-23a-3p表达水平。建立雌性小鼠骨质疏松模型后提取BMSCs, 将miR-23a-3p inhibitor和miR-阴性对照(NC)分别转染入BMSCs, 检测miR-23a-3p表达水平, 同时检测成骨基因Runx2、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)信使RNA(mRNA), 酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量。培养HEK293细胞, 将miR-23a-3p模拟物和miR-NC分别于野生型Runx2 3’端非编码区(3’UTR)(WT)或突变型Runx2 3’UTR(Mut)重组质粒共转染, 使用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。最后将miR-23a-3p inhibitor和miR-23a-3p inhibitor+siRunx2分别转染入BMSCs, 检测Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA含量及ALP含量, 两样本两组间比较采用t检验。结果 PMOP患者血清中miR-23a-3p表达量高于对照组(0.872±0.307比0.382±0.183, t=7.514, P<0.05)。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中miR-23a-3p表达量低于转染miR-NC组(0.480±0.045比1.361±0.113, t=-16.213, P<0.05), 差异有统计学意义。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA表达量及ALP含量高于转染miR-NC组[0.608±0.065比0.234±0.041, 0.523±0.053比0.229±0.046, 0.652±0.060比0.381±0.030, (5.569±0.377) U/L比(2.513±0.308) U/L, t=9.409、9.036、10.846、14.036, P<0.05], 差异有统计学意义。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因检测进一步证实了Runx2是miR-23a-3p的直接靶点。转染miR-23a-3p inhibitor+siRunx2的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA表达量及ALP含量低于转染miR-23a-3p inhibitor组[0.373±0.051比0.600±0.083, 0.321±0.015比0.645±0.030, 0.417±0.027比0.617±0.065, (3.733±0.056) U/L比(6.751±0.091) U/L, t=5.188、21.491、6.414、63.040, P<0.05], 差异有统计学意义。结论 miR-23a-3p通过负调控Runx2基因的表达抑制BMSCs成骨分化。

• 单位
  河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室; 郑州大学第一附属医院