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摘要
目的:探讨不同浓度芹菜素(API)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症反应和极化的作用,并阐明其可能机制。方法:将RAW264.7细胞分为RAW264.7组(不做任何处理)和RAW264.7+API组(2、4、8、16和32μmol·L-1API)。药物处理细胞24 h后,CCK-8法检测各组细胞增殖率,选取API实验浓度。将RAW264.7细胞分为RAW264.7组(正常RAW264.7细胞)、RAW264.7+ox-LDL组(0.08 g·L-1ox-LDL诱导24 h)、RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组(2μmol·L-1 API和0.08 g·L-1ox-LDL诱导24 h)和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组(8μmol·L-1API和0.08 g·L-1ox-LDL诱导24 h),药物处理细胞24 h,采用油红O染色观察各组RAW264.7细胞中泡沫细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素4 (IL-4)和白细胞介素10 (IL-10)水平,Western blotting法检测各组细胞中核转录因子κB(NF-κB) p65、磷酸化NF-κB (p-NF-κB) p65、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、信号转导与转录激活因子6 (STAT6)、磷酸化STAT6 (p-STAT6)和精氨酸酶1 (Arg-1)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,随着API的浓度增加,RAW264.7细胞增殖率降低(P<0.05),选择无毒的低浓度(2μmol·L-1)和高浓度(16μmol·L-1)API作为后续实验API浓度。油红O染色,RAW264.7组极少数RAW264.7细胞被油红O染色;RAW264.7+ox-LDL组较多细胞被染成暗红色,胞内脂质明显增加,表明成功建立了RAW264.7源性泡沫细胞;RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组和RAW264.7+oxLDL+高剂量API组少量细胞被油红O染色。ELISA法检测,与RAW264.7组比较,RAW264.7+ox-LDL组、RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β水平升高(P<0.05),IL-4和IL-10水平降低(P<0.05);与RAW264.7+oxLDL组比较,RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β水平降低(P<0.05),IL-4和IL-10水平升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与RAW264.7组比较,RAW264.7+ox-LDL组、RAW264.7+oxLDL+低剂量API组和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组RAW264.7细胞中iNOS和p-NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05),Arg-1和p-STAT6蛋白表达水平降低(P<0.05);与RAW264.7+ox-LDL组比较,RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组RAW264.7细胞中iNOS和p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05),Arg-1和p-STAT6蛋白表达水平升高(P<0.05);与RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组比较,RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组RAW264.7细胞中iNOS和p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05),Arg-1和p-STAT6蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:API能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中泡沫细胞形成和调控巨噬细胞向M2极化,改善炎症反应,其机制可能与NF-κB和STAT6通路有关。
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单位华中科技大学同济医学院附属协和医院
