大蒜胞外囊泡活性成分解析及其缓解小鼠结肠炎作用

作者：廖柳月; 朱珍珠^*; 杨倩; 刘琴

来源：食品科学, 2023, 44(07): 132-141.

• 大蒜
• 胞外囊泡
• 活性成分
• 抗炎活性
• 结肠炎

目的：解析大蒜胞外囊泡(garlic-derived extracellular nanovesicles,GENs)的活性成分并探究其对小鼠结肠炎的作用。方法：采用超速离心与蔗糖密度梯度离心法从蒜汁中分离纯化GENs，并对其形貌和结构进行表征。采用液相色谱串联质谱联用仪对GENs进行脂质分析和蛋白质组学分析；采用RNA转录组测序技术进行小RNA(microRNA,miRNA)序列鉴定和靶基因预测分析。构建Caco-2单层肠上皮细胞模型，脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后，通过荧光光谱测定细胞渗透表观系数；采用试剂盒法测定上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量；采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)质量浓度。C57BL/6J小鼠口服给予GENs(20、100、500 mg/(kg mb·d))，评估GENs的毒性，同时考察GENs对质量分数3%葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导结肠炎小鼠的疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分和结肠长度的影响；采用苏木精和伊红对结肠组织切片进行染色；采用ELISA和试剂盒法测定小鼠血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α和NO的水平。结果：GENs为纳米级杯状囊泡，含有26种脂质、62种蛋白质和317种miRNA，脂质中磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)含量最高，预测出5种miRNAs可靶向编码人炎性细胞因子的基因。GENs能显著减轻LPS引起Caco-2单层细胞的损伤，抑制NO的产生，调节细胞因子IL-6、IFN-γ、TNF-α和IL-1β分泌水平。体内实验表明，各剂量范围内GENs无毒性；当GENs剂量为100 mg/(kg mb·d)时能显著降低小鼠DAI评分(P<0.05)，改善DSS引起的结肠缩短和病理损伤，下调DSS引起的血清中IL-6、IFN-γ及NO水平升高。结论：GENs可能通过磷脂酰胆碱和特定miRNA共同作用，保护肠道屏障损伤，调节炎性介质分泌水平，抑制细胞内炎症反应，缓解DSS诱导的小鼠结肠炎。

• 单位
  南京财经大学